1.利用Cas13特异性敲降CircRNA：

RfxCas13d是circRNA干扰的最佳系统，通过使用跨越BSJ位点的gRNAs靶向序列，具有最高的干扰效率，并且对其同源mRNA没有可检测的影响。与shRNA及siRNA介导的circRNA敲除相比，RfxCas13d BSJ gRNA系统显示circRNA干扰的更高效率，并具有更高的目标序列保守性，更加高的特异性。（PMID：33288960）

图1 RfxCas13d-BSJ-gRNA系统可以高效敲降circRNA而不影响mRNA （e）对比RfxCas13d-BSJ-gRNA与shRNA在敲低circRNA时特异性及效率。（f）以circPOLR2A为例，展示gRNA间隔序列的精确设计（覆盖BSJ位点），并通过qRT-PCR验证其对circRNA和线性mRNA的差异化调控效果。

2.MECP2重复综合征治疗：

MECP2是一种罕见且致命的X连锁神经发育障碍性疾病，由X染色体上MECP2基因重复导致的MeCP2蛋白过表达引起。利用AAV递送RNA编辑工具hfCas13Y及靶向MECP2基因的sgRNA，在小鼠模型中实现了大脑内hfCas13f和MECP2sgRNA的稳定、持久表达。试验结果表明该系统可以显著降低了大脑MECP2基因的表达水平，显著改善了MDS小鼠的运动功能，焦虑抑郁样行为等。（PMID：39668251）目前该药物的临床试验已正式启动（NCT06615206）。

图2 通过AAV-hfCas13Y RNA编辑系统实现MECP2体内敲低效率（a）AAV载体设计结合不同hfCas13Y和MECP2 gRNA。（b）将不同AAV载体注射至6周龄野生型C57B6L小鼠海马体DG区过程。（c）注射AAV 4周后，通过qPCR检测小鼠海马体中hfCas13Y AAV基因组DNA的量。（d）注射AAV 4周后，通过RT-qPCR检测小鼠海马体中Mecp2mRNA的表达水平（e,f）通过WB检测小鼠海马体中MeCP2、HA和GAPDH的表达（e），并定量MeCP2蛋白水平。

Hurler综合征治疗：

通过AAV递送环状ADAR招募RNA（circ-arRNA）递送到人源化IDUAW402X小鼠模型中恢复α-L-艾杜糖苷酶活性。图5（PMID: 37672590）

图5通过腺相关病毒（AAV）递送环状反义RNA（circ-arRNA），在人源化IDUAW402X小鼠模型中恢复肝脏和大脑的α-L-艾杜糖醛酸苷酶活性。A给药时间表和取样示意图B注射AAV-PHP.eB 6周后，人源化Hurler综合征小鼠中枢神经系统（左）和各器官（右）的IDUAW402X转录本编辑率；C使用4-甲基伞形酮IDUA底物检测中枢神经系统（左）、各器官（中）和血清（右）的IDUA蛋白催化活性；D AAV-PHP.eB感染6周后中枢神经系统（左）和各器官（右）的GAG含量；E不同脑区IDUAW402X转录本的旁观编辑NGS结果；F不同组别小鼠肝脏的苏木精-伊红染色。红色箭头指示因GAG积累形成的泡沫状巨噬细胞